1. - Tinción de BAAR
Tinción de BAAR (para bacterias acido alcohol resistentes), una de las técnicas más empleadas para la identificación de actinomicetos positiva para N. brasiliensis y N. asteroides A partir de los cultivos esta técnica permite conocer la afinidad tintorial del agente etiológico y visualizar con mayor detalle los filamentos que constituyen a - un determinado actinomiceto. La técnica más utilizada para teñir filamentos de actinomicetales acido-alcohol resistentes, son las de Fite, Ziehl - Nielsen y Gram.
2.- Hidrólisis de Almidón
Se siembra una cepa a estudiar en medio Agar Almidón en placa, se incuba a 28°C durante 15 días, cuando ha pasado este tiempo se observa el crecimiento de la colonia y al medio de Almidón se le adiciona una solución Yodada o Lugol de Gram., se espera 30 min. El resultado positivo es observado por la presencia de una zona transparente alrededor de la colonia del hongo, el resto del medio se torna de color azul marino. Esta prueba es positiva para las especies de A madurae, S. sompliensis y variable para N .brasiliensis.
3. - Hidrólisis de Caseína
Para esta prueba se utiliza el medio de Agar con Leche descremada de tipo comercial (Sveltes). Se siembra la cepa en el centro de la placa y se incuba a 28°C durante un periodo de 10 días. La prueba se considera positiva por la presencia de una zona transparente alrededor de la colonia, esto significa que se ha efectuado la Hidrólisis de Caseína, esta prueba es de gran utilidad para diferenciar a Nocardia brasiliensis de Nocardia asteroides. La enzima caseinasa se manifiesta en las siguientes especies: N. brasiliensis, A. madurae y S. somaliensis.
4. - Hidrólisis de Gelatina.
La prueba se realiza en un medio de Gelatina Nutritiva en tubo, en forma de pico de flauta, se siembra el hongo en el centro de la inclinación, se coloca en refrigeración y se lee a los 8 días. El resultado se considera positivo cuando se observa la licuefacción de la gelatina, la prueba es positiva ·para las especies de N. brasiliensis, S. somaliensis y A. madurae.
5.- Hidrólisis de Urea
La urea se prepara por el Método de Cristensen, medio gelificado en tubo, el hongo se siembra en el centro de la inclinación y se incuba a 28°C, se lee al cuarto día. La prueba se considera como positiva si el color del medio se torna de un color rosa mexicano, la enzima ureasa se manifiesta en las especies N. brasiliensis y N. asteroides.
6. - Descomposición de Tirosina
Los cristales de Tirosina se preparan en Agar Bacteriológico en placa, el hongo se siembra en el centro de la placa y se incuba a 28°c durante un periodo de 15 días con lectura diaria. La prueba se considera positiva por la aparición de una zona transparente alrededor de la colonia, además de un obscurecimiento del resto del medio, positiva para las cepas de S. somaliensis y variable para A. madurae.
7 y 8. - Descomposición de Xantina e Hipoxantina
Estas pruebas se preparan de la misma forma que el medio de Tirosina; el hongo se siembra el centro de la placa, se incuba a 28°C durante 15 a 20 días haciendo una lectura diaria. El resultado positivo a estas pruebas es observado por la presencia de un halo transparente alrededor de la colonia, el resto del medio no sufre cambio. La descomposición de Xantina, fue negativa para todas las cepas de actinomicetos que se obtuvieron en este trabajo. Las especies positivas, para la descomposición de la Hipoxantina son N. brasiliensis y A. madurae.
